薄層色譜法的優缺點及操作步驟
來源/作者:中國標準物質網  日期:2014-10-27 11:06:06

(1)定義薄層色譜,或稱薄層層析,薄層層析是把支持物均勻涂布于支持板(常用玻璃板,也可用滌綸布等)上形成薄層,然后用相應的溶劑進行展開。從而對混合樣品進行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術。

(2)分類薄層層析可根據作為固定相的的支持物不同,分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。

(3)方法的優缺點

①優點:操作方便、設備簡單、顯色容易等特點,同時展開速率快,一般僅需15~20min;混合物易分離,分辨力一般比以往的紙層析高10~100倍,它既適用于只有
0.01μg的樣品分離,又能分離大于500mg的樣品作制備用,而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類的腐蝕性顯色劑。

②缺點:對生物高分子的分離效果不甚理想。

(3)操作步驟

①薄層板制備:除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩地移動涂布器進行涂布(厚度為
0.2~O.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30min,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。

②點樣:除另有規定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.Ocm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

③展開:展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.Ocm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規定距離(一般為10-15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項下的規定檢測。

④顯色:取出的薄層板,立即噴灑顯色劑,使其顯色,計算Rf值或使之出現各種有色的斑點,與標準進行對照比較,可確定其成分。

【關鍵詞】薄層色譜 優缺點 中國標準物質
河北快三遗漏